Питательная среда левина. Питательные среды Раппопорта, Эндо, Левина, Рессела, Клиглера: тип среды, состав, назначение, принцип действия
Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.
Среда Эндо – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).
Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.
Среда Рессела Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:
Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.
Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглютинирующих сальмонеллезных сывороток. Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.
Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:
1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.
2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.
3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.
Бактерионосительство при брюшном тифе. Какими серологическими реакциями можно подтвердить хроническое бактерионосительство? Диагностикумы, используемые для этой цели. Единственным доказательством бактерионосительства является выделение от носителя культур S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, с помощью вспомогательных методов: серологическая р-ция и алергическая кожная проба с Vi-тифином (он содержит Vi-антиген, который при взаимодействии с Vi-антителами дает местную аллергическую р-цию в виде покраснения и припухлости в течении 20-30 минут). Положительная р-ция с Vi-тифином говорит о том, что в орг-ме есть Vi-антитела и возможно S. typhi.
Хр. бактерионосительство подтверждается РНГА. При этом используются Vi-диагностикум, т.к. при формировании брюшнотифозного бактерионосительства хар-но проявление Vi-антител; диагностический титр р-ции 1:40.
Способы заражения брюшным тифом. Источник инфекции. Заражение брюшным тифом происходит только оральным путем. Источником инфекции являются больные люди и бактерионосители (представляют опасность для окружающих в течении нескольких лет после перенесенной болезни).
Левина среда Левина среда
(лактозоэозинметиленовый агар) - дифференциально-элективная среда для выделения энтеробактерий. Позволяет отличить лактозоферментирующие (образуют темно-синие или черные колонии) от неферментирующих лактозу к-р (колонии цвета среды). Протей формирует изолированные оранжевые колонии. Среду готовят добавлением к 100 мл 1,5% МПА, рН 7,2 - 7,4, 2 мл 0,5% водного р-ра метиленового синего, 1,5 мл 2% р-ра эозина, 2 г лактозы и 0,2 г двухосновного калия фосфата, затем разливают ее по чашкам Петри. Среда имеет светло-фиолетовый цвет. Промышленность выпускает сухой препарат, к-рый готовят по указанию на этикетке. Вариант Л.с. -лактозобромти-моловая среда- не обладает ингибирующими св-вами против клебсиелл склеромы.
(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)
Смотреть что такое "Левина среда" в других словарях:
- (М. Levine, род. в 1889 г., амер. бактериолог) плотная дифференциально диагностическая питательная среда для выявления не разлагающих лактозу патогенных бактерий сем. Enterobacteriaceae (возбудителей брюшного тифа, дизентерии и др.); состоит из… … Большой медицинский словарь
- (ые) (ы) искусственный субстрат, представляющий собой сбалансированную смесь питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и деления микроорганизмов или клеток высших организмов. Питательная среда Адамса см. Адамса… … Медицинская энциклопедия
См. Левина среда … Большой медицинский словарь
См. Левина среда (Источник: «Словарь терминов микробиологии») … Словарь микробиологии
- (тетрабромфлюоресцеин) краситель (см. Красители) красного цвета и флюорохром зеленовато желтого цвета. Растворим в воде и этаноле. Применяют для крашения цитоплазмы и составе краски Романовского Гимзы, а также как ингибитор некоторых бактерий в… … Словарь микробиологии
У этого термина существуют и другие значения, см. Детская музыкальная школа № 1. Детская музыкальная школа №1 г. Пензы … Википедия
Культурологи ческие и социально психологические теории, описывающие и объясняющие человеч. поведение и социальную реальность через взаимодействие между людьми. Элементы Т.в. содержались в социологии Зиммеля, феноменологии Гуссерля и… … Энциклопедия культурологии
- (колиинфекции) заболевания, обусловленные бактериями рода Escherichia (см.). Облигатные энтеропатогенные варианты кишечной палочки вызывают специфическое заболевание колиэнтерит(см.). Клин, картина Э., обусловленных условно патогенными кишечными… … Словарь микробиологии
Общежитейский и науч. термин, обозначающий: 1) человеч. индивида как субъекта отношений и сознат. деятельности (лицо, в широком смысле слова) или 2) устойчивую систему социально значимых черт, характеризующих индивида как члена того или… … Философская энциклопедия
Т. п. была создана Куртом Левином, считавшим, что для понимания поведения необходимо принимать во внимание всю ситуацию целиком, т. е. гештальт ситуацию. Левин распространил свои идеи на новые области, взяв за образец мышления мат. построения… … Психологическая энциклопедия
— питательная среда для выделения, подсчета и различия грамотрицательных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae.
Состав
В состав среды входят:
- пептон
- Калия фосфат
- лактоза
- Эозин Y
- Метиленовый синий
- Агар-агар
Среда имеет pH около 7 и сохраняется в темноте. Готовая среда имеет красновато-сиреневое окраски, неопалесцирующий с зеленоватым оттенком и легким преципитатом, если в чашках Петри формируется гель.
Назначение и принцип действия
Эта среда разработана американским микробиологом Левином (Levine) и используются для дифференциации Escherichia coli и Enterobacter aerogenes, а также для быстрой идентификации грибов Candida albicans. Американские микробиологи рекомендуют это среда для выделения, подсчета и розрзнення грамотрицательных микроорганизмов кишечной (колиформные) группы. Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Эти красители служат в качестве индикаторов расщепления лактозы. На этой среде могут расти в виде точечных колоний дрожжи и некоторые грам-положительные бактерии, например, энтерококки.
Микробиолог Велд (Weld) предложил использовать агар Левина с добавлением хлор-тетрациклина гидрохлорида для быстрой идентификации грибов Candida albicans в клиническом материале. Выявление этих грибов в таком материале, как фекалии, оральный и вагинальный секрет, ногти, чешуйки кожи и другое возможно через 24-48 часов при инкубации при 35-37 ° С в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа. Однако культуральные свойства грибов при этом варьируют.
Культуральные свойства
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37 ° С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост
Escherichia coli (25922) Обильный
Pseudomonas aeruginosa (27853) Обильный
Salmonella typhimurium (14028) Обильный
Candida albicans (10231) Хороший или обильный (в атмосфере с 10% углекислого газа)
Enterobacter aerogenes (13048) Хороший
Staphylococcus aureus (25923) Слабый или отсутствует
Saccharomyces cerevisiae (9763) Слабый или отсутствует
Enterococcus faecalis (29212) Подавляется
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 37,5 г порошка М022 или 27,5 г порошка М301 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Добавить соответствующий углевод к Основе агара Левина (М301) перед стерилизацией. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Остудить до 50°С и встряхнуть для окисления метиленового синего (чтобы восстановить его синий цвет и размешать хлопьевидный преципитат). Если среда используется в тот же день, ее можно не автоклавировать.
Предупреждение : среду надо хранить в темноте, чтобы не допустить ее окисления на свету.
Принцип и оценка результата:
Эта среда разработана Levine (1, 2) и используется для дифференциации Escherichia coli и Enterobacter aerogenes , а также для быстрой идентификации грибов Candida albicans . Американские специалисты рекомендуют эту среду для выделения, подсчета и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной (колиформной) группы (3, 4, 5).
Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Данные красители служат в качестве дифференцирующими индикаторами ферментации лактозы. На этой среде могут вырастать в виде точечных колоний дрожжи и некоторые грамположительные бактерии, например, энтерококки. Weld (6, 7) предложил использовать агар Левина с добавлением хлортетрациклина гидрохлорида для быстрой идентификации грибов Candida albicans в клиническом материале. Обнаружение этих грибов в таком материале, как фекалии, оральный и вагинальный секрет, ногти, чешуйки кожи и другом возможно через 24-48 ч инкубирования при 35-37°С в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа. Однако культуральные свойства грибов при этом варьируют.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком и легким преципитатом, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор М022 (3,75% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2, водный раствор М301 (2,75% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) |
Рост |
Цвет колоний на среде М317 |
Escherichia coli (25922) |
Обильный |
Черно-синие с металлическим блеском |
Pseudomonas aeruginosa (27853) |
Обильный |
Бесцветные |
Salmonella typhimurium (14028) |
Обильный |
Бесцветные |
*Candida albicans (10231) |
Хороший или обильный |
Бесцветные |
Enterobacter aerogenes (13048) |
5. Speck M. (Ed.), 1992, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3rd ed., APHA, Washington, D.C. 6. Weld J. T., 1952, Arch. Dermat. Syph., 66:691. 7. Weld J. T., 1953, Arch. Dermat. Syph., 67(5):433. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С в темноте. |
Состав (в пересчете на 1 л готовой среды):
Пептон ферментативный, сухой - 10,0 г.
Экстракт автолизированных дрожжей осветленный - 1,5 г.
Лактоза - 10,0 г.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 2,0 г.
Агар микробиологический - 13,0 г.
Натрия хлорид - 3,0 г.
Эозин натрия, индикатор - 0,4 г.
Метиленовый голубой, индикатор - 0,075 г.
Плотная питательная среда для выделения и дифференциации энтеробактерий из исследуемого материала по признаку ферментации лактозы.
Сухую среду в количестве 40 г размешать в 1 л воды очищенной, довести до кипения и кипятить до полного расплавления агара (2-3 мин), профильтровать через ватно-марлевый фильтр, Разлить в стерильные бутылки и стерилизовать автоклавированием при температуре 112 оС в течение 20 мин. Стерильную среду охладить до температуры 45-48оС и разлить в стерильные чашки Петри; после застывания агара подсушить чашки при температуре 37оС в течение 40-60 мин. Цвет готовой среды должен быть красновато кирпичный.
Готовую среду до использования можно хранить в темном месте не более 7 сут при температуре 2-8°С.
Посевы исследуемых образцов инкубировать 18-48 ч при температуре 37°С Контроль роста визуальный – по наличию или отсутствию и внешнему виду колоний. Лактозоположительные микроорганизмы образуют непрозрачные колонии от светло-сиреневого до фиолетового цвета с металлическим блеском или без него. Лактозоотрицательные микроорганизмы образуют прозрачные или полупрозрачные бесцветные колонии (могут образовывать колонии бледно-розового цвета).
Утилизация сухих сред с истекшим сроком хранения и использованных готовых питательных сред – в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.728-99 Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений.